8. РАЗБАВЛЕНИЕ И ХРАНЕНИЕ СПЕРМЫ

На сегодняшний день существуют следующие методы хранения спермы:

1. Кратковременное хранение при комнатной температуре в течение не более 4-х часов. Используется как разбавленная, так и неразбавленная сперма. Разбавляют сперму пастеризованным молоком 1:8. При осеменении свежеполученной спермой, получают результаты оплодотворяемости, сравнимые с естественной случкой. Процент положительных результатов — около 85%, практически, как при естественном осеменении.

2. Хранение при температуре +5°С

Эякулят сразупосле получения и оценки, разбавляют специальной синтетической средой и сохраняют в охлажденном до +5°С состоянии (в обычном холодильнике) в течение 2—4 суток. Это позволяет транспортировать сперму.

В качестве разбавителя используют различные среды, в состав которые входят вещества, оказывающие защитное влияние на половые клетки.

Разбавители по Шетцу:

1) сухой порошок молока — 10,0; желток куриного яйца 10,0: вода дистиллированная — до 100,0.

2) 2%-ный раствор глицерина с желтком.

3) 5—6%-ная глюкоза или фруктоза с желтком.

4) 3%-ный натрий-цитрат с желтком.

Разбавитель по Баутиной Е.П.: гликокол — 1,82; цитрат натрия — 0,72; желток куриного яйца 5,0; вода дистиллированная до 100,0.

Процедура осеменения собак охлажденной спермой аналогична таковой при использовании свежеполученной спермы, но перед введением в половые пути суки подогревают дозу спермы в водяной бане.

В случае применения высококачественных разбавителей и проведения осеменения в оптимальное по отношению к овуляции время, возможно, получать от охлажденной спермы высокую (75—80%) оплодотворяемость. Но обычно результативность осеменения охлажденной спермой на 20% ниже, по сравнению с использованием свежеполученной спермы.

3. Хранение в жидком азоте (-196°C)

Метод предусматривает использование замороженной в жидком азоте спермы. Срок годности спермы практически не ограничен.

При использовании для искусственного осеменения замороженной спермы, необходимо соблюдать определенные зооветеринарные требования.

Центры по криоконсервации спермы собак работают во многих странах мира и используют практически одинаковые методы её замораживания, но при этом применяют различные синтетические разбавители, в том числе и патентованные.

Сперму кобелей обычно замораживают в виде гранул объёмом 0,2 мл или в полипропиленовых соломинках объемом 0,25 мл. Преимуществами замораживания спермы в соломинках являются лучшие условия стерильности и возможность их маркировки данными о производителе: порода, кличка, дата взятия семени и т. д.

Оттаивают сперму, замороженную в гранулах, при 37°С в изотонических растворах, а соломинки — в водяной бане при 35—37°С.

При использовании замороженной спермы на оплодотворяемость сук оказывают влияние многие факторы: состав синтетической среды, качество спермы, температура ее оттаивания, число биологически полноценных спермиев в дозе, время осеменения, техника осеменения и место введения спермы в половые пути суки.

В дозе спермы перед замораживанием должно содержаться не менее 150—200 млн подвижных спермиев.

Сразу после получения и оценки, эякулят разбавляют в 2—3 раза специальным криозащитным разбавителем, содержащим различные вещества, предохраняющие спермии от повреждений во время замораживания. В частности, в их состав обязательно входят глицерин и желток куриного яйца.

Состав разбавителя:

ТРИС 6,06 гр; фруктоза 2,5 гр: лимонная кислота 3,4 гр; дистиллированная вода 184 гр; глицерин 8 гр; желток 20 гр; трициллин 0,5 гр.

После разбавления сперму охлаждают в холодильнике в течение 2—3 часов до +4°С, а затем замораживают с использованием жидкого азота до температуры -196°С.

При хранении замороженной спермы в жидком азоте (в сосуде Дьюара), она способна сохранять биологическую полноценность в течение многих десятков лет.

Поскольку, в процессе замораживания-оттаивания разрушается до 50%спермиев, желательно вводить дозу непосредственно в полость матки. Процент положительных результатов до 60%.